培養(yǎng)基這里我們還有最后一個(gè)培養(yǎng)就沒有說,那就是鑒別培養(yǎng)基。
對(duì)于鑒別培養(yǎng)基的研究,我們便選擇可以分解纖維素的微生物來談。
在談到纖維素分解菌的時(shí)候,我們需要先談一談纖維素。
纖維素是由葡萄糖首尾連接而成的高分子化合物。地球上最多的糖類就是纖維素,天然界中棉花的含有的纖維素含量是最高的。
纖維素不能被人體分解,但是可以被食草型動(dòng)物分解,因?yàn)槭谴蠖鄶?shù)食草型動(dòng)物中,它們的腸腔內(nèi)含有可以分解纖維素的相關(guān)細(xì)菌。
在我們?nèi)粘V械纳唐分写嬖谥鞣N各樣的纖維素,其中有天然纖維制成的水溶性的羥甲基纖維素鈉,還有不溶性的微晶纖維素。
在此,我們需要知道,纖維素酶是一種復(fù)合酶,它包括C1酶、Cx酶和葡糖糖苷酶。
C1酶、Cx酶這兩種酶可以將纖維素分解成纖維二糖,之后還需要葡萄糖苷酶,用葡萄糖苷酶將纖維二糖分解為葡萄糖。
此外,纖維素分解酶最適ph值為4.8,所以當(dāng)調(diào)制外界環(huán)境為4.8時(shí),酶的活性是最大的,所以我們盡量控制在這個(gè)ph值時(shí)。因?yàn)槔w維素酶營造適宜的環(huán)境后,纖維素酶可以提高效率的分解纖維素。
之后,就該嘮嘮,如何進(jìn)行纖維素分解菌的篩選。
在實(shí)驗(yàn)過程中我們選用剛果紅染料,進(jìn)行鑒定。剛果紅染料的簡(jiǎn)稱為cr。
剛果紅加上纖維素會(huì)形成紅色復(fù)合物,如果纖維素分解后,就會(huì)形成以纖維素分解菌為中心的透明圈。
這樣我們就可以將纖維素分解菌進(jìn)行鑒別,從而將纖維素分解菌鑒別出來。
具體的操作有:
一首先進(jìn)行土壤取樣,此時(shí)的進(jìn)行土壤取樣時(shí),應(yīng)選擇有多年落葉的腐殖土這樣,獲得纖維素分解菌的程度更加容易。
之后就是進(jìn)行提取和分離,這些都與分離尿素分解菌的方法相同。
之后就是鑒別培養(yǎng)基的培養(yǎng)的制作。鑒別培養(yǎng)基的制作的話就是在完全培養(yǎng)基中加入剛果紅染料,這樣就可以進(jìn)進(jìn)行制作了,并且鑒別培養(yǎng)基是一種固體培養(yǎng)基。而且必須是鑒別培養(yǎng)基,這樣才能準(zhǔn)確的找到纖維素分解菌固定的位置。
而且為了提高反應(yīng)的難易程度,我們可以將完全培養(yǎng)基改換成選擇培養(yǎng)基,這樣可以防止有其它雜菌進(jìn)行干擾。這里要改變的是,把普通碳源換成以纖維素為唯一碳源的成分。
培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)時(shí),我們鑒別的方法就是剛果紅染色法嘍。
剛果紅染色法有兩種,第一種是直接在開始時(shí)加入剛果紅染色劑,之后進(jìn)行培養(yǎng),當(dāng)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的無色透明圈時(shí),那么,中心則就是纖維素分解菌的存在場(chǎng)所。
此外還有另一種方法,就是在培養(yǎng)纖維素分解菌之后,再利用剛果紅染色法進(jìn)行染色,這樣同樣可以看到現(xiàn)象,哪里沒有紅色,哪里就是纖維素分解菌的菌落。
這兩種方法而言,第二種方法染色可能會(huì)加深。但也是有價(jià)值的。
實(shí)際生活實(shí)驗(yàn)中,可以根據(jù)所需的思路的不同,進(jìn)行選擇不同的染色方法。這就是對(duì)于鑒別培養(yǎng)基的使用和應(yīng)用。